BPT LCM 用 FFPE 切片 HE 染色流程

Posted on by KevinZhou

0. 备物

  1. PEN覆膜玻片
  2. 多聚赖氨酸(Poly-L-Lysine, PLL) 溶液(1x, 0.1mg/ml ) (组织难附着时用，净泡玻片24h，干燥24h)
  3. Gill's II 苏木素
  4. 分子筛
  5. 大培养皿（5片/皿）

1. FFPE 切片脱蜡+梯度水化

  1. 切片置于染色架，放入65℃烘箱50min
  2. 二甲苯I 15min
  3. 二甲苯II 15min
  4. 无水乙醇 5min
  5. 90%乙醇 5min
  6. 80%乙醇 5min
  7. 70%乙醇 5min
  8. 无酶水冲洗 5min
二甲苯的作用：脱去切片中的石蜡，起透明作用，使切片更容易观察，使后面步骤染液充分进入组织中
乙醇的作用：洗脱二甲苯，使水进入组织中，充分水化。

2. H(E) 染色

  1. 苏木素染色
    1.1 (影响DNA提取) Harris’s 苏木素：苏木素1min--自来水冲洗5min--盐酸乙醇分化3s--自来水冲洗10min（返蓝）
    1.2 Gill’s II 苏木素：苏木素滴染15s，自来水冲洗15min，擦拭薄片背面残留苏木素
  2. (跳过) 伊红染色1min30s，可用75%酒精脱伊红，注意也会脱去苏木素，自来水冲洗1min

3. 脱蜡+水化

  1. 二甲苯I 15min
  2. 二甲苯II 15min
  3. 100%乙醇 5min
  4. 90%乙醇 5min
  5. 80%乙醇 5min
  6. 70%乙醇 5min

4. 干燥+储存

  1. 置入加入了分子筛的皿中2天即可切割
  2. 后续保存与分子筛皿中